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成纖維細胞的培養(yǎng)方法

更新時間:2016-10-13      點擊次數(shù):3622
     成纖維細胞是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,屬于終末分化細胞,這種細胞會制造膠原蛋白等蛋白質(zhì)。成纖維細胞數(shù)目zui多,胞體大,為多突的紡錘形或星形的扁平細胞,細胞核呈規(guī)則的卵圓形,細胞輪廓不清,具有突起。其形態(tài)尚可依細胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發(fā)生改變。
    成纖維細胞胞體較大,胞質(zhì)弱嗜堿性,胞核較大呈橢圓形,染色質(zhì)疏松著色淺,核仁明顯。電鏡下,其胞質(zhì)可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和發(fā)達的高爾基復(fù)合體,表明它具有合成和分泌蛋白質(zhì)的功能。成纖維細胞尚可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機基質(zhì)。它合成的前膠原蛋白分子經(jīng)內(nèi)切酶作用,聚合和重排,可形成與成骨細胞合成分泌的膠原原纖維一樣具有64nm周期橫紋的膠原原纖維,膠原原纖維經(jīng)互相粘合形成膠原纖維。經(jīng)檢測,這兩種細胞合成分泌的膠原纖維均是Ⅰ型膠原纖維,在形態(tài)和生化結(jié)構(gòu)上*相同。 處于成熟期或稱靜止?fàn)顟B(tài)的纖維細胞,胞體變小,呈長梭形,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體均不發(fā)達,被稱為纖維細胞。在外傷等因素刺激下,部分纖維細胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細胞,其功能活動也得以恢復(fù),參與組織損傷后的修復(fù)。另外,在結(jié)締組織中,仍保留著少量具有分化潛能的間充質(zhì)細胞,它們在創(chuàng)傷修復(fù)等情況下可增殖分化為成纖維細胞。
    成纖維細胞的培養(yǎng)方法:
    分離培養(yǎng)
    成纖維細胞的分離培養(yǎng)一開始并不涉及成骨作用,而主要是用于研究細胞的老化、各種外來因子對細胞的損傷、細胞在體外條件下的惡性轉(zhuǎn)化、以及某些先天性代謝異常、酶缺陷等。由于皮膚成纖維細胞易于獲取,又易于在體外生長,皮膚成纖維細胞培養(yǎng)已在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到較廣泛的運用,其分離培養(yǎng)技術(shù)已相對成熟,對其體外生長規(guī)律也有了較全面的認識。
    原代培養(yǎng)
    成纖維細胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法,其中組織塊法又因其操作簡便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常,以酶消化法獲得的成纖維細胞懸液在接種后5~10min即可見細胞以偽足初期附著,與底物形成一些接觸點;然后細胞逐漸呈放射狀伸展,胞體的中心部分亦隨之變扁平;zui快者大約在接種后30min,細胞貼附底物即較為*,呈現(xiàn)成纖維細胞的形態(tài)。采用組織塊法則大約在接種后2~3天到1周左右,在接種的皮膚組織塊周圍長出細胞。待細胞融合成片,鋪滿培養(yǎng)容器底壁大部分時即可進行傳代。一般都采用胰蛋白酶(trypsin),將成纖維細胞從底壁消化下來后分瓶作傳代培養(yǎng)。成纖維細胞在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分裂增殖能力。細胞分裂時變?yōu)榍蛐?分裂后又平鋪在附著物的表面成為有突起的扁平細胞。體外培養(yǎng)的成纖維細胞,其生命期限與物種等因素有關(guān)。
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