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黑色素瘤細胞株的傳代培養(yǎng)

更新時間:2015-09-26      點擊次數(shù):3177
   黑色素瘤細胞株在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞株能繼續(xù)生長,同時也將細胞株數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞株種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)黑色素瘤細胞株進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型黑色素瘤細胞株直接分瓶就可以,而貼壁細胞株需經(jīng)消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化貼壁細胞株成單個細胞株,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA 是一種二價離子的螯合劑,能抑制黑色素瘤細胞株膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細胞株消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置,先用胰酶-EDTA 消化液清洗細胞株(5.0 -10.0 ml/75cm),然后棄去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ,觀察細胞株直到細胞株變圓脫離瓶壁,此過程一般需要5-15分鐘,為了避免細胞株成團,消化黑色素瘤細胞株的過程中不要拍打細胞株瓶。對于特別難消化的細胞株,可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞株置于37°C 促進消化,細胞株脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化,血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。一般情況下,離心并不需要。如果黑色素瘤細胞株需要無血清或者低血清的培養(yǎng)基,可以以125000g 轉(zhuǎn)速離心5分鐘,然后棄去中止用的培養(yǎng)基,加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細胞株,移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細胞株類型而定,一般是1:2-1:20,具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會對某些細胞株的黑色素瘤細胞株膜產(chǎn)生損傷,對于這種類型的細胞株,可用細胞株刮輕輕刮下細胞株,加入適量的培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻細胞株,然后進行傳代培養(yǎng)。
  為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)黑色素瘤細胞株因傳代而遲早會出現(xiàn)變異,有時因寄贈、交換和購買,培養(yǎng)細胞從一個實驗室轉(zhuǎn)運到另一個實驗室,*的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊黑色素瘤細胞株的遺傳特性極為重要。現(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于*停止狀態(tài),故可以長期保存。細胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細胞的嚴重損傷。
  傳代黑色素瘤細胞株可提供復(fù)蘇,凍存細胞,ATCC細胞。具體可根據(jù)科研人員要求決定。代做各種細胞服務(wù)。
  對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使黑色素瘤細胞株基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/div>
 
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